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通过分析GenBank数据库中25株不同流行性乙型脑炎病毒基因组序列,设计了3对特异性引物,组合成LAMP扩增引物组。对反应体系进行优化后建立了一步法反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。该检测方法检测时问短,从处理样品至结果判定可在2 h内完成。灵敏度比常规RT-PCR灵敏度高,可检测出103 PFU/0.2 ml乙型脑炎病毒。检测方法特异性强,对猪细小病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒等常见猪病病毒均无交叉反应。
结果判定不需要电泳检查,在扩增产物中加入SYBR Green I染料,可直接在可见光下观察或在紫外光下观察颜色变化。该方法简便快捷,省时省力,是一种适用于基层实验室快速准确诊断流行性乙型脑炎病毒的检测方法。