【摘 要】
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目的: 克隆人BMI-1(the B cell-specifics moloney murineLeukemia Virus integrationsire-1)基因,研究其在COS7(猴胚肾成纤维细胞)细胞衰老中所发挥的作用,并探讨其在骨髓间
【机 构】
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江苏大学医学技术学院,江苏镇江212001
【出 处】
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中国生物化学与分子生物学会临床应用生物化学与分子生物学分会成立大会暨第一届临床应用生物化学与分子生物学学术大会
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目的: 克隆人BMI-1(the B cell-specifics moloney murineLeukemia Virus integrationsire-1)基因,研究其在COS7(猴胚肾成纤维细胞)细胞衰老中所发挥的作用,并探讨其在骨髓间质干细胞(MSCs)及肿瘤细胞中的表达.
方法: 采用RT-PCR,real-time PCR,免疫荧光,基因克隆及转染等技术克隆人BMI-1全长基因,观察转染后细胞相关基因的表达改变,精确测定并比较BMI-1基因在胚胎MSCs、成人MSCs、A549(人肺腺癌细胞株)、SW-480(人结肠腺癌细胞株)、U937(人髓系白血病细胞株)、健康人外周血淋巴细胞以及白血病细胞中表达水平.
结果: 克隆了人BMI-1基因全长,并构建了真核表达载体PCDNA3.1(+)-GFP-BMI-1:基因转染后,通过G418筛选得到稳定表达的细胞系(COS7-BMI-1),与野生型COS7细胞相比,COS7-BMI-1中p16,pRb基因明显被抑制,而p21,p53,htag基因的表达水平无明显改变:胚胎MSCs中BMI-1的表达水平高于成人MSCs,慢性粒细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病中BMI-1的表达量分别高于急性粒细胞白血病和急性淋巴细胞白血病,U937和A549中的表达量高于SW480,健康人外周血淋巴细胞中BMI-1的表达明显低于慢性髓系白血病(p<0.01).
结论: BMI-1基因的高表达能够通过下调p16基因抑制p16-pRb途径的激活,从而促进细胞的增殖和分化,但BMI-1基因并没有能够引起包括p21,p53及端粒酶相关基因(htag)的表达改变,说明不同细胞在发生衰老和凋亡时的机制存在差异: BMI-1基因在MSCs、各种肿瘤细胞株和白血病骨髓细胞中表达的差异,这种差异可能与骨髓干细胞和肿瘤细胞的生长、分化以及组织类型有一定的关系.
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