【摘 要】
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本文以基因工程菌株里氏木霉(Trichodermareesei)染色体DNA为模板,通过PCR技术克隆了r-PA基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体中,测序结果表明克隆到的r-PA基因序列长1.1kb,与已发表的r-PA基因同源性达99.91％,其编码的氨基酸顺序一致.构建了甲醇毕赤酵母(Pichiamethanolica)分泌性表达载体pMETαA-r-PA,用PacⅠ单酶切将pMETαA-
【机 构】
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天津科技大学生物工程学院天津,300222;齐齐哈尔大学生命科学与工程学院齐齐哈尔,161006
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本文以基因工程菌株里氏木霉(Trichodermareesei)染色体DNA为模板,通过PCR技术克隆了r-PA基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体中,测序结果表明克隆到的r-PA基因序列长1.1kb,与已发表的r-PA基因同源性达99.91％,其编码的氨基酸顺序一致.构建了甲醇毕赤酵母(Pichiamethanolica)分泌性表达载体pMETαA-r-PA,用PacⅠ单酶切将pMETαA-r-PA线性化后,采用电转化的方法将其导入甲醇毕赤酵母PMAD16中,通过PCR和表型鉴定表明筛选到r-PA基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上的阳性克隆.经摇瓶初步培养及以甲醇为唯一碳源诱导表达,胞外r-PA表达水平最高达1675.62IU/mL.
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