三七总皂苷对豚鼠膝关节骨性关节炎软骨NF-κBp56及TNF-α表达的影响

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  目的:通过观察三七总皂苷对骨性关节炎豚鼠关节软骨病理改变以及软骨下骨核转录因子 NF-κBp65、肿瘤坏死因子-α蛋白表达的影响,来探讨PNS防治OA的作用机理.期望为临床应用提供实验基础,扩宽OA的治疗领域.方法:将32只3月龄健康状态良好的雌性豚鼠随机分为4大组,分别为模型组(M组)16只、氨基葡萄糖组(A组)8只、三七总皂苷组(Q组)8只,另选8只1月龄健康的雌性豚鼠作为正常组(Z组).正常组与模型组各取8只直接处死采集膝关节软骨组织标本;模型组剩余8只豚鼠每日给予等量的去离子水灌胃两月后处死采集关节软骨组织.A组给予氨基葡萄糖连续灌胃两月,Q组给予血塞通片连续灌胃两月,随后采集膝关节软骨标本;采集软骨标本后观察并记录软骨表面大体肉眼观,然后立刻固定于 4%的多聚甲醛溶液中不少于24小时,然后将其置于配置好的EDTA-2Na脱钙液中室温下持续脱钙30天.脱钙完成后进行梯度酒精脱水,石蜡包埋,常规切片(厚度 4um),一部分行番红O-固绿染色,显微镜下观察软骨形态并采用Mankins评分,另一部分切片用于TNF-α和NF-kBp65免疫组化分析.结果:(1)不同月龄豚鼠膝关节软骨表面大体观:Z组豚鼠膝关节软骨面完整、光滑有光泽,关节面软骨呈淡蓝色.M3组膝关节外观正常,关节面完整,部分区域光泽度欠佳,关节轻微发黄未见裂纹.M5组关节面整体缺乏光泽,关节面可见轻微粗糙,关节液变暗且稠.Q组膝关节关泽度欠佳,关节面完整,部分区域光泽度欠佳,关节软骨轻微发黄.A组在关节面、关节液的表现上均优于相同月份模型组.(2)关节软骨番红O-固绿染色及 Manking's评分:Z组软骨外观完整,软骨细胞分布均匀,软骨基质染色匀称,软骨细胞形状无改变,潮线清晰连续.M3组软骨表面可见微弱缺损,基本完整,软骨细胞分布不均,可见部分基质染色丢失,潮线模糊但连续;M5组软骨表面可见细小缺损,软骨细胞排列混乱且数量不多软骨基质染色明显不一致,潮线不连续;三七总皂苷组软骨表面基本完整,软骨细胞较少排列不均,软骨基质颜色深浅不均,潮线模糊连续;M5氨基葡萄糖组软骨表面可见微小缺损,软骨细胞排列不均,软骨基质染色较同月龄模型组好.(3)三七总皂苷对骨性关节炎模型豚鼠关节软骨 TNF-α和 NF-kBp65表达的变化.随着豚鼠月龄增加,豚鼠软骨下TNF-α和 NF-kBp65的表达明显增高,各组之间均有显著差异,具有统计学意义(P<0.01).A组、Q组与同月龄M5组比较,TNF-α和 NF-kBp65的表达有明显差异(P<0.01).结论:三七总皂苷能够可能通过免疫调节的机制来降低TNF-α和 NF-kBp65软骨下骨的表达,从而起到抑制软骨软骨退变的作用.
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