【摘 要】
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CD63蛋白是四跨膜蛋白超家族中的一员,在信号转导和免疫等过程中起到重要作用。本文将中国明对虾CD63(Fenneropenaeus chinensis,Fc CD63)的大胞外环区(Large extracellular
【机 构】
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中国水产科学研究院黄海水产研究所; 上海海洋大学;
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CD63蛋白是四跨膜蛋白超家族中的一员,在信号转导和免疫等过程中起到重要作用。本文将中国明对虾CD63(Fenneropenaeus chinensis,Fc CD63)的大胞外环区(Large extracellular loop,LEL)基因片段克隆并与原核表达载体p BAD/gⅢA连接成功获得重组表达载体p BAD/gⅢA-CD63L,并转化入大肠杆菌TOP10中,经L-阿拉伯糖(L-Arab)诱导并经钴离子亲和层析纯化得到重组蛋白。质谱分析显示重组蛋白的正确性。Far-western blot分析显示Fc CD63L可以与WSSV膜蛋白VP28相互作用,为确定VP28与Fc CD63L作用的关键功能区段,将VP28分为N-端和C-端两段表达,Far-western blot结果显示Fc CD63L与VP28C的作用强于与VP28N的作用。ELISA分析表明VP28C与Fc CD63L的相互作用随Fc CD63L浓度的增加而增强。中和实验结果显示Fc CD63L能明显延缓对虾的死亡,对WSSV感染有显著的抑制作用。实时定量PCR结果显示注射Fc CD63L组的对虾鳃中WSSV拷贝数低于阳性对照组,表明Fc CD63L在WSSV侵染的过程中起到重要作用。
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