Defensin是一类广谱抗菌阳离子小肽的总称,可快速、非特异性地杀灭入侵的病原体,同时对螺旋体、分歧杆菌及原生动物也有一定的杀灭作用。本文通过同源基因克隆和RACE技术,首次获得卵形鲳鲹defensin的cDNA全长序列。该基因序列全长为592bp,其开放阅读框长为192bp,编码63个氨基酸,含有一个20个氨基酸的信号肽及含6个半胱氨酸残基、3对二硫键的成熟肽,推测蛋白质分子质量7.217kD,理论等电点为8.88。BLAST检索表明,该基因所编码的多肽与多种鱼类来源的β-defensin抗菌肽的同源性很高,推测其是鱼类β-defensin抗菌肽家族的一个成员。荧光定量PCR结果表明,β-defensin基因在各个组织中均有表达,其中在肠道、头肾、后肾等免疫相关器官中的表达量最高,在鱼类非特异性免疫应答中发挥重要作用。同时,利用插入酶切位点的引物扩增不含信号肽的该基因cDNA编码序列,将扩增得到的目的基因和PET-32a质粒经BamhⅠ和SalⅠ双酶切后连接构成重组质粒,转化入BL2-1表达菌株,利用IPTG诱导表达。通过利用SDS-PAGE分析,对表达条件进行了优化,结果表明,在16℃条件下,利用0.1 mM IPTG诱导16h后其表达效率最高。表达产物分子量与预测值相符,重组融合蛋白主要以可溶性形式在上清中高效表达,利用Ni-Agarose His标签蛋白亲和柱进行纯化,可得到较高纯度的融合蛋白。研究结果为深入研究β-defensin蛋白活性及其非特异性免疫机制奠定基础,同时对开发利用海水鱼类抗菌肽、研发新型渔药或饲料免疫添加剂提供参考。