本研究基于BVDV5UTR基因保守序列，设计并合成引物和探针，优化各种反应条件及反应体系，建立了一种BVDV重组酶聚合酶扩增(RPA)等温检测方法，检测结果在抗FAM金标结合和抗生物素捕获抗体的侧流层析试纸条上显示。结果表明，所建立的RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应20min，即可实现对目的片段的有效扩增;以已知病毒滴度的cDNA为模板，RPA的检测限达到2TCID50的靶标分子，同世界动物卫生组织(OIE)推荐的实时荧光PCR方法检测限一致;与感染牛其他病毒的基因组cDNA DNA没有交叉反应，特异性强。所建立的牛病毒性腹泻病毒RPA-LFD检测方法，可应用于血液、鼻拭子、精液、粪便、乳汁、气溶胶样本、组织器官等样本的检测，能特异、灵敏地筛查阳性持续感染牛，为及时淘汰牛群内的隐患提供技术支持。