【摘 要】
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目的：优化支气管上皮组织的蛋白质样品制备方法,建立人支气管上皮癌变过程各阶段组织的双向电泳(2-DE)图谱。
方法：收集、筛选人支气管正常上皮、鳞状化生、不典型增生和上
【机 构】
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中南大学湘雅医院医学实验研究中心,长沙410008中南大学湘雅医学院肿瘤研究所,长沙410078中南大学湘雅医院医学实验研究中心,长沙410008
【出 处】
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2003年中国博士后生命科学学术研讨会暨院士论坛
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目的：优化支气管上皮组织的蛋白质样品制备方法,建立人支气管上皮癌变过程各阶段组织的双向电泳(2-DE)图谱。
方法：收集、筛选人支气管正常上皮、鳞状化生、不典型增生和上皮浸润癌组织标本。脱氧胆酸-三氯醋酸(DOC-TCA)法抽提组织的总蛋白质,固相pH梯度双向凝胶电泳分离总蛋白质,凝胶经银染显色后,用ImageMaster 2D软件分析2-DE图谱。
结果：应用DOC-TCA法提纯的支气管上皮总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人支气管上皮组织的双向电泳图谱。正常上皮、鳞状化生、不典型增生和浸润癌4种组织凝胶的平均蛋白质点数依次为1190±63,1227±69,1272±71和1326±82。选取同一例鳞状上皮化生组织进行3次重复性检测,3块凝胶的平均点数为1216±75,平均匹配点数为1082±67,匹配率达89.3％,且3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向的偏差为(O.835±O.247)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(O.921±O.104)mm。
结论：1)DOC-TCA沉淀法是一种较好的支气管上皮组织蛋白质样品制备法；2)初步建立了分辨率较高、且重复性好的人支气管上皮癌变各阶段组织的双向凝胶电泳图谱,为进一步鉴定肺鳞癌癌变相关蛋白质奠定了基础。
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