【摘 要】
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目的：构建小鼠Foxp3分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,感染B16细胞,获得稳定表达Foxp3的B16细胞,研究Foxp3基因对B16细胞生长的影响.方法：以小鼠Foxp3的测序质粒为模板,PCR扩增Foxp3全长,装入慢病毒表达载体,经过测序证实其序列与标准序列完全一致.将Foxp3慢病毒表达载体用LipofectamineTM2000转染293细胞,包装成感染性病毒颗粒,感染B16细
【机 构】
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青岛海慈医疗集团检验科 山东大学免疫学研究所
【出 处】
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第一次全国中西医结合检验医学学术会议
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目的：构建小鼠Foxp3分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,感染B16细胞,获得稳定表达Foxp3的B16细胞,研究Foxp3基因对B16细胞生长的影响.
方法：以小鼠Foxp3的测序质粒为模板,PCR扩增Foxp3全长,装入慢病毒表达载体,经过测序证实其序列与标准序列完全一致.将Foxp3慢病毒表达载体用LipofectamineTM2000转染293细胞,包装成感染性病毒颗粒,感染B16细胞后,获得稳定表达Foxp3蛋白的B16细胞,并通过细胞生长技术及克隆形成实验进一步研究Foxp3基因对B16细胞的作用.
结果：PCR扩增得到编码小鼠Foxp3的1290bp基因片段,与预期大小一致;Foxp3重组慢病毒感染B16细胞后,荧光镜观察到绿色荧光,PCR检测到B16细胞表达Foxp3并用流式细胞术进一步检测到Foxp3在慢病毒感染后B16中的稳定高表达;活细胞计数及克隆形成实验结果显示Foxp3转染组B16细胞存活率低于空载体组.
结论：成功构建了Foxp3慢病毒表达载体,包装出感染性病毒颗粒,重组慢病毒感染Foxp3细胞后表达出有活性的Foxp3蛋白,且Foxp3蛋白的表达对B16细胞生长产生一定抑制作用,为进一步研究Foxp3分子在肿瘤免疫逃逸机制中的作用奠定了基础.
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