目的:通过建立的RP-HPLC检测方法鉴定单核苷酸分离效果。 方法:以核酸酶P1酶解RNA产物为材料，对离子交换树脂分离混合5’-核苷酸的工艺条件进行研究。 结果:阳离子交换树脂NH-1可使4种单核苷酸有效分离，洗脱顺序依次为UMP→GMP→CMP→AMP:最佳分离条件为:色谱柱径高比=1∶20，RNA酶解液上样浓度20g/L，吸附时间8h，洗脱流速0.5mL/min。确定RP-HPLCC18反相柱的色谱条件为:流动相KH2PO4-甲醇，在30mmol/LKH2PO4(pH5.5)以及0.5mL/min流速条件下，按照KH2PO4:甲醇:100:0→97:3，15min，97:3→95:5，1min进行梯度洗脱。通过外标法对混合单核苷酸的分离效果进行检测。 结论:证明增加吸附时间是改善分离效果的重要因素。