果胶裂解酶、木聚糖酶融合蛋白在毕赤酵母中的高效表达及其活性鉴定

来源 :第五届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运作服务研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:woaiwojiaren5210
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  以海栖热袍菌(Thermotoga maritima)DSM 3109基因组DNA为模板,克隆出果胶裂解酶(pectate lyase,ply)基因的成熟肽编码序列(1104bp),编码367个氨基酸;以类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)H10-3基因组DNA为模板,克隆出木聚糖酶(xylanaseA,xynA)基因的成熟肽编码序列(636bp),编码211个氨基酸.通过重叠延伸PCR (SOE-PCR)得到拼接片段ply-1-xynA,并将其克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中,得到重组质粒pPIC9-ply-l-xynA,重组质粒线性化后经电击转化到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,得到了表达成功的工程菌.得到了表达成功的工程菌PLX7.在PLX7发酵上清液中同时检测到果胶裂解酶活性(11.2U/mL)和木聚糖酶活性(63.3U/mL).
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