单细胞中8-羟基鸟嘌呤的TOF-SIMS成像分析

来源 :第五届中国二次离子质谱学会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qncy1230s
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本研究拟应用TOF-SIMS检测活细胞中的8—羟基鸟嘌呤,为DNA的氧化损伤鉴定提供新的方法。选用的细胞株为人乳腺癌MCF-7细胞,对照组不进行任何处理,另一组经5mM的H202处理三十分钟。对照组和氧化处理后的细胞均固定于硅片上,经洗涤后置于液氮中快速冷冻,冷冻干燥机中冻干后进行TOF-SIMS检测。由于DNA主要位于细胞核内,因此首先应用Cs源剥离掉细胞膜部分,以脂肪酸碎片m/z=255作为细胞膜的特征指示峰,当其峰强度降至基线时认为细胞膜部分已经被移除。剥离细胞膜后,应用Bi3+源检测细胞核中的8—羟基乌嘌呤质谱峰,并对其进行成像分析。TOF-SIMS分析从两组细胞核内都检测到8—羟基乌嘌呤的信号峰(Inset,m/z=167.5),从成像谱图中可以清晰的看到细胞核中8—羟基乌嘌呤的分布。同时还发现对照组MCF-7细胞的细胞核中8—羟基鸟嘌呤的成像信号强度比经过5mM H202处理后的信号强度弱,与文献报道的H202可以造成DNA损伤程度增加的结论一致。这一结果表明,TOF-SIMS能灵敏地检测单细胞中的8—羟基鸟嘌呤,监测单细胞内的DNA氧化损伤。
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