LPS对IPEC-J2细胞内P-gp表达的影响

来源 :中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nathan_zk
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  [目的]本试验拟以IPEC-J2细胞作为研究对象,检测LPS处理后细胞膜表面P-gp定位、总mRNA和总蛋白水平的变化情况,进一步探究LPS对猪组织细胞内P-gp表达的影响.[方法]试验首先用MTT法检测LPS对细胞的毒效应,并选用1、10和50μg/mL作为安全浓度处理.其次选用浓度为10 μg/mL的LPS处理细胞不同时间,并用免疫荧光检测细胞膜上P-gp定位和表达的变化.最后,用高、中、低三个浓度的LPS分别处理IPEC-J2细胞1、3、6、12和24 h,并分别用荧光定量和Western blot的方法检测总mRNA及总蛋白表达水平.[结果]免疫荧光的结果表明,细胞膜上P-gp定位并没有发生改变,但荧光强度在处理1h后轻微减弱,3-24h增强.荧光定量结果表明,LPS处理1h后50μg/mL浓度下Abcb1 mRNA表达显著下降,其他浓度差异不显著;处理3h后,Abcb1 mRNA表达和对照相比均明显增加;6h和3h比表达降低,但和对照比差异不显著;12h后表达和对照比下降,但统计学差异不显著;24h后mRNA的表达回复至对照水平.Western blot的结果显示,LPS处理1h后细胞内P-gp总体表达水平呈浓度依赖性的降低;3h后细胞内P-gp总体表达水平呈浓度依赖性的增加;6h后,细胞内P-gp总体表达水平和对照相比又呈现抑制状态;12h后1 μg/mL组P-gp水平与对照比略有增加,10 μg/mL和50 μg/mL LPS仍抑制P-gp的表达,但抑制程度比6h低;24h后1 μg/mL组P-gp表达量和对照相比又极显著降低,而10 μg/mL和50 μg/mL组P-gp表达量则逐渐回复接近对照水平.[结论]试验结果表明LPS处理后P-gp在IPEC-J2细胞膜上的表达量变化与猪组织细胞膜上的表达变化一致,均呈增加趋势,但其总RNA和总体蛋白表达水平与体内试验结果相似,均呈下降趋势.
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