半夏离体块茎诱导过程中GA相关基因的鉴定与表达分析

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半夏为中国常用的大宗中药材之一,其市场需求较大,当前大田种植的半夏难以满足市场需求。因此,如何提高半夏的产量成为一个重要的科学问题。实验室借助半夏块茎的离体诱导体系,发现GA3可抑制半夏块茎的发育,但相关机制并不清楚。本文研究初步发现,外源施加70 mg/L的矮壮素可有效抑制半夏离体块茎中的内源GA3含量,进而促进离体块茎的诱导。借助抑制消减杂交方法,成功构建了半夏离体块茎发育过程中GA3调控的相关消减文库。选取300个单克隆进行测序,经筛选获得226个有效的表达序列标签(ESTs),其中84个为未知基因的表达序列标签,剩余的142个ESTs主要为39个基因的表达序列标签。选取5个感兴趣的ESTs进行表达分析,发现离体块茎诱导过程中60S核糖体蛋白基因、26S核糖体RNA基因、锌转运蛋白基因、12kD储存蛋白基因及苹果酸脱氢酶基因的表达均受矮壮素处理发生显著的变化,表明上述基因均为半夏块茎发育过程中GA3参与调控的基因。因而,本文挖掘GA3调控半夏块茎发育的相关候选基因,有助于通过基因工程手段对半夏进行品种改良,进而实现半夏产量的提升,服务于生产。
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