【摘 要】
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目的 应用免疫蛋白组学从结核分枝杆菌H37Rv基因组中的RD区筛选出两个新的结核特异性抗原,通过肽指纹质谱及其生物信息学的方法鉴定为结核分枝杆菌ESXO和Rv3117,构建重组蛋白ESXO和Rv3117,并对其免疫原性进行评估.方法 采用常规分子克隆方法获得结核分枝杆菌ESXO和Rv3117的基因片段.将酶切处理后的基因片段分别定向克隆到原核表达载体pET-32a,酶切分析和序列测定为ESXO和R
【机 构】
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河南中医学院;上海交通大学医学院 上海交通大学医学院
【出 处】
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中华医学会结核病学分会2012年学术大会
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目的 应用免疫蛋白组学从结核分枝杆菌H37Rv基因组中的RD区筛选出两个新的结核特异性抗原,通过肽指纹质谱及其生物信息学的方法鉴定为结核分枝杆菌ESXO和Rv3117,构建重组蛋白ESXO和Rv3117,并对其免疫原性进行评估.方法 采用常规分子克隆方法获得结核分枝杆菌ESXO和Rv3117的基因片段.将酶切处理后的基因片段分别定向克隆到原核表达载体pET-32a,酶切分析和序列测定为ESXO和Rv3117的阳性重组子,将其转入E.coli BL21 plysS(DE3),阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定,用镍亲和层析法纯化重组蛋白.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核ESXO和Rv3117的抗体水平,并与结核早期分泌蛋白ESAT-6和CFP-10的检测结果进行比较.结果 重组抗原ESXO和Rv3117成功在大肠杆菌中获得表达,其在E.coli BL21 plysS(DE3)中以可溶性形式存在,ESXO分子量为27.3KDa,Rv3117分子量为48.1KDa,与预期相符.ELISA血清免疫学评估显示ESAT-6,CFP-10,ESXO和Rv3117的特异性分别为94.0%(45/48),95.8% (46/48),94.0% (45/48)和97.9%(47/48),敏感性分别为28.6% (24/84),41.7% (35/84),32.1% (27/84)和28.6% (24/84).结论 利用pET-32a原核表达系统成功表达和纯化了RD区结核分枝杆菌ESXO和Rv3117重组蛋白,ELISA试验显示两种重组蛋白的特异性和敏感性都较高.实验结果为重组蛋白ESXO和Rv3117的进一步免疫学研究和应用奠定基础.
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