目的:构建人CyclinE新靶点的干扰RNA真核表达载体,转染人脑胶质细胞瘤U251细胞,经RT-PCR检测后,观察CyclinE表达受抑制后的人脑胶质瘤细胞的增殖、凋亡以及侵袭转移的能力的变化,为进一步研究CyclinE表达受抑制后对人脑胶质瘤细胞质和细胞核蛋白组学的影响及人脑胶质瘤发生、发展、诊断与治疗提供有价值的资料。方法:1.构建CyclinE新靶点干扰RNA真核表达载体并用双酶切和测序鉴定。2.顺势转染成功后,通过RT-PCR比较转染组和未转染组及阴性对照组的CyclinE mRNA的表达量。3.用MTT法检测CyclinE表达受抑制前后细胞增殖能力的变化。4.用流式细胞法检测CyclinE表达受抑制前后细胞凋亡能力的变化。5.用Transwell小室法检测CyclinE表达受抑制前后细胞侵袭能力的变化。结果:1.成功构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体,经鉴定证实,构建的siRNAs载体全部是阳性克隆,与序列基因库中序列完全相同,并且未发现有突变、缺失、插入等异常存在。2.与阴性质粒组细胞和空白对照组细胞相比,PCyclinE-1-U251细胞的CyclinEmRNA表达水平显著下降。3.PCyclinE-1-U251细胞组与阴性质粒组细胞组和空白对照组细胞相比增殖能力减弱、凋亡增加、侵袭能力减弱。结论:成功构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体,和对照组相比其增殖能力减弱、凋亡增加、侵袭能力减弱。为研究人脑胶质瘤新的肿瘤标志物提供了新的蛋白质和靶点,为人脑胶质瘤发生、发展、诊断与治疗提供更多的资料。