论文部分内容阅读
研究目的:HSPA5是内质网应激伴侣并调节未折叠蛋白反应。在多种内外因素的作用下,肿瘤细胞的未折叠蛋白反应被激活,HSPA5表达升高。药物治疗后HSPA5升高会促进肿瘤形成并使其耐药性增强。HSPA5还参与免疫调节和肿瘤逃逸过程。文献报道miRNAs在多种肿瘤中表达异常并在细胞增殖、凋亡、分化、表观遗传学改变等生物学过程中发挥重要作用。HSPA5在HBV相关肝癌中的表达及其分子机制有待阐明,miRNA可能在其中起到重要作用。研究方法:miRNA芯片检测HepG2和HepG2.215之间miRNA的表达差异。实时定量PCR和WB检测miR-181a和miR-362以及HSPA5的表达。组织化学检测组织标本中HSPA5的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miRNA直接靶向HSPA5。细胞计数实验、集落形成实验、划痕实验、transwell实验等检测miRNA对肝癌细胞生物学行为的影响。研究结果:miR-181a和miR-362在HBV阳性肝癌组织标本中表达明显高于HBV阴性肝癌组织标本,并在分化程度较低的肝癌组织标本中表达明显高于分化程度较高的肝癌组织标本和海绵状血管瘤肝脏标本。miR-181a和miR-362对肝癌细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭等生物学行为有明显促进作用,而抑制miR-181a和miR-362可逆转肝癌细胞的恶性表型。HSPA5在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织与海绵状血管瘤组织,但在HBV阳性的肝癌组织标本中表达低于HBV阴性的肝癌组织标本。HSPA5是miR-181a和miR-362的靶基因,miR-181a和miR-362在mRNA水平和蛋白水平均能降低HSPA5的表达。HBV相关质粒转染肝癌细胞使miR-181a和miR-362的表达增加而HSPA5的表达降低。研究结论:肝癌组织中HSPA5的表达显著高于癌旁组织与海绵状血管瘤组织,但在HBV阳性的肝癌组织标本中表达较低;miR-181a和miR-362在HBV阳性的肝癌组织标本中表达明显升高,并且对肝癌细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭等生物学行为有明显促进作用。进一步研究证明HSPA5是miR-181a和miR-362靶基因。HBV感染能增加miR-181a和miR-362的表达并且降低HSPA5的表达对肝细胞及其肝癌发生与发展的作用有待进一步研究。