【摘 要】
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目的:建立离体培养细胞成纤维细胞凋亡模型,观察外用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对成纤维细胞S100蛋白表达的影响.方法:体外培养成纤维细胞,分成两组:(1)烫伤组:5％小牛血清
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目的:建立离体培养细胞成纤维细胞凋亡模型,观察外用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对成纤维细胞S100蛋白表达的影响.方法:体外培养成纤维细胞,分成两组:(1)烫伤组:5％小牛血清浓度的DMEM培养细胞24hr,45℃恒温水浴锅中孵育10min,制备烫伤后凋亡模型(n=4);(2)bFGF组:5％小牛血清浓度的DMEM培养细胞24hr,45℃恒温水浴锅孵育10min后立即加入bFGF(10ng/ml)(n=4).30min后采用免疫荧光双标记和激光扫描共聚焦显微镜技术观察比较两组成纤维细胞caspase-3蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)以及S100蛋白、SH2蛋白和磷酸酪氨酸蛋白(p-tyr)的变化情况.结果:热损伤可以导致培养的成纤维细胞凋亡.细胞内可以同时表达caspase-3蛋白和PCNA两种抗体.加入bFGF刺激剂处理后,烫伤成纤维细胞内caspase-3蛋白降低(灰度值由140±31降至75±22,p＞005).而PC-NA的表达明显增强(灰度值由52±8增至131±17,p＜0.05).同时,烫伤组成纤维细胞S100蛋白与p-tyr表达阳性.bFGF组S100蛋白和SH2-P的表达明显减弱(S100的灰度值由201±31降至29±4,p＜0.05;SH2蛋白灰度值由342±57降至174±23,p＜0.05).p-tyr的表达略有减弱(灰度值由284±46降至210±33,p＞0.05).结论:离体情况下,热损伤可诱导成纤维细胞凋亡信号的表达;S100蛋白参与bFGF对热应激引起的凋亡成纤维细胞的增殖和抗凋亡作用中扮演重要角色.
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