【摘 要】
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本研究用无特定病原(SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鸭源分离株A/Duck/Guangxi/2/2000(H5N1),Trizol试剂提取鸡胚尿囊液中的病毒基因组总RNA,利用禽流感病毒8段基因的特异性引物,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增该病毒8个基因片段的cDNA.扩增出8段基因的全序列,经纯化回收后测序,进行序列分析.结果表明:A/Duck/Guangxi/2/2000(H5N
【机 构】
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内蒙古农业大学动物科学与医学学院,呼和浩特,010018 北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京,1
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会
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本研究用无特定病原(SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鸭源分离株A/Duck/Guangxi/2/2000(H5N1),Trizol试剂提取鸡胚尿囊液中的病毒基因组总RNA,利用禽流感病毒8段基因的特异性引物,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增该病毒8个基因片段的cDNA.扩增出8段基因的全序列,经纯化回收后测序,进行序列分析.结果表明:A/Duck/Guangxi/2/2000(H5N1)病毒是H5N1亚型高致病力禽流感病毒.其HA基因与1999年和2000年的香港分离毒株的高度同源,说明它们起源于同一种系.A/Duck/Guangxi/2/2000(H5N1)毒株与GSHK3014.8/00(H5N1)毒株NS基因的238位核苷酸到252位核苷酸均缺失,且二者有高同源率.A/Duck/Guangxi/2/2000(H5N1)毒株的NS基因与1997年香港毒株(包括人源毒株)也有较高同源性,说明它们位于同一个基因群系.
其他文献
以犬2型腺病毒(CAV-2)为载体构建出能表达FPVVP2蛋白的重组病毒.首先通过PCR从FPVGT-2株细胞培养物中扩增出VP2蛋白基因,将其克隆到真核表达质粒pVAX1中,并将其中含有FPVVP2基因的完整表达盒酶切后(CMV-VP2-PolyA)进一步定向克隆到含有CAV-2E3区的穿梭质粒pVAX△E3中,构建出pVAX△E3VP2.用SalⅠ+NruⅠ双酶切pVAX△E3VP2,回收含有
禽流感免疫后再发病一般死亡率在5-60％,耐过后的鸡肝硬化,呈胶皮状,且生殖系统有不同程度的损伤.青年鸡由于生殖系统尚未发育完全,产蛋性能的影响一般不大,但死亡率较高.产蛋期的鸡染病后虽然死亡率不高,但对生产性能有极严重的影响,产蛋率一般很难超过70％.
2005年10月份至2006年7月份,全市共抽检养鸡场(户)1053家,检测血样12708份.按禽流感H5亚型疫苗免疫后不同时间检测抗体效价进行统计.结果:H5亚型免疫后20-30天,31-60天,61-90天,91-120天,121-150天,150天以上6个时间段,2005年10月份至2005年3月份,免疫抗体合格率(抗体效价≥25)分别为93.2％、94.6％、81.9％、80％、58.9％
本研究将50ml H9N2禽流感病毒尿囊液(HA为29)加入15ml 50％的红细胞混匀,置4℃24h,在1h、4h、8h各轻轻振荡一次,定时采上清液进行HA测定(HA≤24)取出1500rpm/min离心15min,弃上清,加入5ml生理盐水,37℃水浴4h,每隔30min振荡一次,再1500rpm/min离心20min,取上清进行HA测定为≤212,收集上清液为浓缩、提纯的禽流感病毒.
本实验用纯化的H5禽流感病毒免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经三次克隆和间接ELISA筛选,获得ⅡB6C3、ⅠE6、ⅡA8H11、ⅢF6G8、ⅢC2D1、ⅡE9G8、ⅡA8F12、D2H11、ⅡG6A11等9株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过间接ELISA测定,单抗效价范围是:细胞培养上清1 : 50～1:400,腹水为1 : 3200～1:51200;
本文通过Apa Ⅰ和Not Ⅰ位点将HA基因亚克隆到表达LacZ基因的重组马立克氏病病毒的转移载体中,该转移载体的US片段内含有hCMV启动子和增强子控制的含LacZ和HA基因表达盒克隆,从而成功地构建了表达HA基因的马立克氏病病毒的转移载体.然后,通过脂质体方法转染已感染马立克氏病病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,用96孔板稀释法纯化表达LacZ基因和HA基因的重组MDVCV1988病毒株,获得
本文根据GeneBank中禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)NP、PA和PB1基因保守区序列设计、合成3个小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)--siRNA-NP、siRNA-PA和siRNA-PB1;将siRNA和转染试剂Silent-fect按1:3(ul:ug)比例混合均匀后在鸡胚成纤维细胞(CEF)中转染,4h后接种AIV.
本文以H9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因cDNA为模板,扩增HA基因,PCR产物酶切后与pcDNA3.1(+)质粒进行重组.以重组质粒作为基因疫苗免疫8周龄Balb/C小鼠,应用杂交瘤技术进行细胞融合,通过血凝抑制试验(HI)和ELISA试验筛选,各获得一株阳性细胞株,经三次亚克隆后都能稳定分泌H9 AIV特异性抗体.特异性检测表明单抗与NDV、H5亚型AIV、产蛋下降综合征(EDS76)病毒毒
为了解农村家养鸭高致病致禽流感隐性感染情况,2004-2006年,本研究在湖南省30个县(市区)及31个家乙禽交易市场分别采集家养鸭和待出售鸭的拭子样品4910份和877份,混样后分别采用H5亚型禽流感RT-PCR试验、通用型禽流感RT-PCR试验、接种SPF鸡胚进行病毒分离和亚型鉴定等方法进行检测,结果H5亚型禽流感RT-PCR试验检测阳性样品1份,通用型禽流感RT-PCR试验检测阳性样品6份,
本实验利用禽流感重组核蛋白作为包被抗原,建立了检测鸭血清禽流感抗体的间接ELISA方法,通过对各个工作组份反应条件的优化,确定的最佳工作条件为:包被抗原1∶300稀释(蛋白含量为8μg/mL);待检血清1∶200稀释;酶标抗体1∶7000稀释;封闭时间、待检血清和酶标二抗最佳作用时间均为1.5h.通过对907份鸭血清样本(包括141份免疫血清和766份现地血清)进行检测,经符合实验(AGP和HI)