【摘 要】
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为研究干燥作用对捻转血矛线虫L3期幼虫mRNA表达的影响,筛选并分析与干燥相关表达的基因.分别提取干燥培养和正常培养的虫体mRNA,反转录成cDNA,采用银染mRNA差异基因显示技术
【机 构】
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浙江大学动物科学学院动物医学系,杭州310058
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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为研究干燥作用对捻转血矛线虫L3期幼虫mRNA表达的影响,筛选并分析与干燥相关表达的基因.分别提取干燥培养和正常培养的虫体mRNA,反转录成cDNA,采用银染mRNA差异基因显示技术在干燥和正常培养的银染聚丙烯酰胺凝胶中回收了差异显示条带,并通过RT-PCR和在秀丽线虫内RNAi验证相关抗干燥基因.筛选获得58个差异表达的EST序列,生物信息学分析显示其中49个(84.48％)序列与现有的捻转血矛线虫基因组数据库有高度相似性,20个(34.48％)与已知线虫的cDNA或基因组序列有较高相似性,8个(13.79％)与其它线虫已知蛋白质氨基酸序列相似性较高.差异表达序列BF-U01A包含泛素(UBQ)家族结构域,与秀丽线虫泛素家族氨基酸相似性高达95％.差异表达序列GH-U02A与已知捻转血矛线虫谷胱甘肽-S-转移酶(GST)氨基酸相似性为87％.RT-PCR显示UBQ和GST在干燥虫体中均上调,在秀丽线虫中对UBQ,GST进行RNAi后,干燥虫体生存率下降,证明筛选的GST,UBQ基因在线虫中确有抗干燥作用.UBQ主要标记需要分解的蛋白质,使其水解,在虫体干燥应激时,可能与蛋白酶体β亚基(PBS)共同作用,降解应激变性蛋白,维持虫体稳定性.GST在虫体干燥时与抗外环境毒素及抗氧化作用相关.其他差异表达序列分别与其他线虫的虾红素金属酶蛋白,转座酶和未知假定蛋白有关,在虫体抗干燥中可能都发挥一定作用.
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