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【目的】比较人类冷冻精子在液氮和液氮蒸汽中的储存效果。对人类精液标本采用液氮和液氮蒸汽两种方法进行冷冻储存,主要观察:1.不同冷冻储存方法对前向运动精子比率、畸形率、DNA完整性等的影响。2.冷冻储存不同时间对前向运动精子比率、畸形率、DNA完整性等的影响。【方法】山东省人类精子库中随机选取正常精液质量样标本48例。全部标本均来自体检合格捐献精子的志愿者,取精前志愿者禁欲3～7d,留取精液于无菌取精杯内,在培养箱中完全液化后,行精液常规检查。留取少量精液用于检测冻前指标,其余精液用于检测冻后指标。将精液与等量的冷冻保护剂充分混匀后,在室温下静置10min后进行相应步骤的静态的蒸汽冷冻,一部分标本直接投到液氮中(-196℃),另外的储存在液氮蒸汽罐中(-167℃)。分别在不同时期进行复苏。主要检测指标:用Makler计数板人工检测前向运动精子比率,采用精子形态学快速染色(Diff-Quik法)试剂盒检测精子的畸形率,荧光染料吖啶橙标记精子DNA,荧光显微镜下检测精子DNA损伤。【结果】与液氮相比较,储存于液氮蒸汽中的冷冻精子复苏后前向运动精子比率、畸形率和DNA完整性等没有明显区别(P>0.05)。两组中,随着冷冻储存时间的推移,前向运动精子比率、畸形率和DNA完整性等呈逐渐降低的趋势。液氮蒸汽中冷冻储存达180天时,上述指标皆有显著性差异(P<0.05)。【结论】在液氮蒸汽中和液氮中冷冻储存人类精子的效果是一致的,前者可以取代液氮成为对精液标本长期储存的一种选择。液氮蒸汽冷冻储存精子时,应该尽量减少存储时间或者操作频率,减轻冷冻温差对精子的影响,最大可能的避免病原微生物的交叉污染。