【摘 要】
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目的：Rho是调控牙髓细胞迁移的重要因子,mDia1和ROCK是RhoA下游的主要效应蛋白.然而,两者之间的关系尚不清楚.本实验拟通过研究活化RhoA (GTP-RhoA)低水平和高水平状态下mDia1和ROCK在牙髓细胞黏附迁移中的调节作用,探讨两者对牙髓细胞的作用模式.方法：采用LPA激活RhoA、siRNA抑制mDia1、Y27632抑制ROCK,通过不同组合实现对牙髓细胞RhoA及其下游信
【机 构】
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四川大学华西口腔医院预防科 四川大学华西口腔医院牙体牙髓科
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目的：Rho是调控牙髓细胞迁移的重要因子,mDia1和ROCK是RhoA下游的主要效应蛋白.然而,两者之间的关系尚不清楚.本实验拟通过研究活化RhoA (GTP-RhoA)低水平和高水平状态下mDia1和ROCK在牙髓细胞黏附迁移中的调节作用,探讨两者对牙髓细胞的作用模式.方法：采用LPA激活RhoA、siRNA抑制mDia1、Y27632抑制ROCK,通过不同组合实现对牙髓细胞RhoA及其下游信号通路的干预.Transwell迁移实验和划痕实验检测牙髓细胞迁移；通过免疫荧光法激光共聚焦显微镜下观察牙髓细胞骨架局部黏附结构；细胞黏附伸展实验检测牙髓细胞的黏附和伸展；Western blotting检测牙髓细胞内磷酸化FAK和paxillin的表达水平.结果：正常培养条件下(GTP-RhoA低水平),抑制mDia1和(或)ROCK促进牙髓细胞迁移；单独抑制ROCK而不是mDia1,显著地改变了细胞形态和肌动蛋白骨架结构；沉默rmDia1增加了细胞黏附以及FAK和paxillin的磷酸化水平.加入LPA时(GTP-RhoA高水平),抑制ROCK仍可促进细胞迁移,但沉默mDia1却抑制细胞迁移；抑制mDia1和(或)ROCK均可抑制LPA诱导的细胞骨架重组；单独抑制mDia1或ROCK增加了细胞的黏附和伸展.结论：mDia1和ROCK可能对牙髓细胞的黏附迁移起着双向调节作用.活化RhoA低水平时,mDia1和ROCK限制细胞迁移,ROCK可能与维持细胞形态和骨架有关；活化RhoA高水平时,mDia1促进细胞迁移,mDia1和ROCK可能与细胞骨架重组有关.
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