应激是机体的不协调状态或内环境稳定受到威胁.过度的应激不仅会影响到动物的健康和还会对动物实验的科学性产生影响.下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)作为神经内分泌网络的枢纽在机体内环境平衡的维持中起重要的作用,是机体感知内稳态失衡威胁时的反应重要部位.miRNA能够调控基因转录后表达,许多研究证实miRNA在神经内分泌系统中显示出重要的作用,如胚胎后期的发育、组织功能的分化和维持、轴突导向、细胞凋亡和突触可塑性,星形胶质细胞活性等.而比格犬由于其较高的耐应激性,被国际公认为最理想的实验动物.因此,本实验以应激耐受性较强的比格犬和应急耐受性较差的中华田园犬为研究对象,采用耳部电刺激方法,分别对3只比格犬及3只中华田园犬进行应激处理10天,同时3只比格犬和3只中华田园犬作为对照组.应激处理后采集应激组及对照组的垂体和肾上腺皮质,抽提组织RNA,采取同品种、同组织样、同处理组进行RNA混池.对RNA混池进行RNA-seq及siRNA-seq以探寻HPA轴上调控应激相关的miRNA和mRNA,及其作用机制.RNA-seq测序结果表明,GRM5、 GRIN2A、 SLC1A2和STA应激后较应急前显著上调表达.同时基于生物学分析,我们发现这四个基因在细胞间的信号传导及互作、神经系统的发育及功能、和一些神经疾病的发生起着重要作用.siRNA-seq结果发现cfa-miR-30a、cfa-miR-34b及cfa-miR-34c在应急前后显著差异表达,其潜在的靶基因为cfa-miR-30a(-GRM5)、cfa-miR-30a(-GRIN2A)、cfa-miR-30a(-SLC1A2)、cfa-miR-34b(-STX1A)及cfa-miR-34c(-STX1A).因此,cfa-miR-30a、cfa-miR-34b及cfa-miR-34c可能是HPA轴上应激调控的关键miRNA.