【摘 要】
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目的：本研究旨在探讨TGF-β1对人卵巢颗粒细胞中LOX表达水平及活性的影响,并进一步研究结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)及经典的TGF-β信号通路在这一过程中的潜在作用.方法：本研究以永生化的人卵巢黄素化颗粒细胞系SVOG(Granulosa-lutein Cells Immortalized With SV40Large T Anti
【机 构】
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首都医科大学附属北京妇产医院生殖医学科 100026
【出 处】
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2016北京地区妇产科学专业学术年会
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目的：本研究旨在探讨TGF-β1对人卵巢颗粒细胞中LOX表达水平及活性的影响,并进一步研究结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)及经典的TGF-β信号通路在这一过程中的潜在作用.
方法：本研究以永生化的人卵巢黄素化颗粒细胞系SVOG(Granulosa-lutein Cells Immortalized With SV40Large T Antigen,SVOG)作为细胞模型.首先,在TGF-β1处理后,采用荧光实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞内LOX和CTGFmRNA和蛋白表达水平,并用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中LOX的浓度.其次,转染CTGFsiRNA后,检测TGF-β1处理对LOX表达水平及活性影响的变化.最后,转染TGF-β超家族Ⅰ型受体特异性抑制剂SB431542,特异性作用于ALK4/5、SMAD2/3/4的siRNA,进一步检测TGF-β1处理后CTGFmRNA和蛋白表达水平.
结果：TGF-pi以时间和浓度依赖的方式明显上调细胞内CTGF和LOX的mRNA和蛋白水平及细胞培养液中LOX的浓度。转染CTGFsiRNA能够阻断TGF-pi对细胞内LOX表达水平及细胞培养液中LOX浓度的上调作用。转染TGF-p超家族I型受体抑制剂SB431542、敲低ALK5、SMAD2/3/4均能够逆转TGF-pi对CTGF表达的上调作用。
结论：在人卵巢颗粒细胞中，TGF-pi通过ALK5介导的SMAD2/3-SMAD4依赖的信号通路上调CTGF的表达，从而引起LOX表达水平和活性的升高。本研究阐明了人卵巢颗粒细胞中TGF-pi和CTGF对LOX表达及活性的调节机制，提示TGF-pi和CTGF在调控排卵期间细胞外基质的重建过程中起重要作用。
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