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目的:系统性红斑狼疮是以B淋巴细胞过度活化、大量自身抗体产生为主要免疫学特征的自身免疫性疾病.本研究考察优化剂量的SM934对MRL/lpr狼疮小鼠的疗效作用,并围绕B细胞进行机制探讨.
方法:(1)In vivo,采用口服一天两次的给药方式分别给予9周龄雌性MRL/lpr小鼠5mg/kg、2.5mg/kg、1.25mg/kg的SM934至27周龄,实验终点检测药物对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎、脾脏及淋巴结肿大、血清细胞因子及自身抗体、脾脏淋巴细胞分群等指标的影响;(2)Ex vivo,考察SM934对TLR7/9激动剂诱导的B细胞的活化、增殖、分化及抗体分泌的影响;(3)采用Real-time PCR及Western blotting方法探究SM934对TLR信号通路及对B细胞分化相关转录因子表达的影响;(4)运用人外周血单核细胞(PBMC),考察SM934对PBMC中B细胞功能的影响;(5)采用不同周龄MRL/lpr小鼠(4周龄-27周龄),从整体水平、血清学水平及细胞水平对疾病发病机制进行病理学研究.
结果:(1)SM934改善MRL/lpr、鼠的狼疮性肾炎，提高生存率、改善蛋白尿，升高血清白蛋白、降低血清尿素氮、肌酐水平，减轻肾脏损伤及免疫复合物沉积。(2)随着疾病发展，MRL/lpr小鼠脾脏及淋巴结重量不断增加，而SM934可减轻其脾脏及淋巴结肿大症状。(3)SM934降低血清抗核抗体并抑制抗体的类别转换，还可降低血清中体液免疫相关细胞因子IL-6、IL-10、IL-21的水平。(4)病理学研究表明，随着年龄增长，MRL/lpr小鼠脾脏细胞中总的B淋巴细胞及生发中心B细胞不断减少，活化B细胞及浆细胞不断增加;而SM934能延缓MRL/lpr小鼠的疾病进程，提高静息态B细胞及生发中心B细胞数量，降低活化B细胞及浆细胞数量。(5)SM934通过抑制B细胞中TLR7/9 mRNA的表达、MyD88蛋白的表达及NF-κB的磷酸化，从而抑制MRL/lpr小鼠B细胞的活化、增殖、IL-6、IL-10的产生以及抗体的分泌，且SM934上调转录因子BCL6的表达而下调Blimp-1的表达。(6)SM934抑制TLR7/9信号介导的人PBMC中B细胞的活化、增殖，并抑制浆细胞的形成及抗体IgG和IgM的释放。
结论:本研究考察了MRL/lpr狼疮小鼠发病过程中一系列的病理学变化，证实了SM934对该模型小鼠的治疗作用，并阐明了SM934通过抑制狼疮中MyD88依赖的TLR7/9信号介导的B细胞的活化、浆细胞的形成及自身抗体的分泌从而治疗狼疮的作用机制，为SM934及其它青篙素类化合物治疗狼疮的研究提供了新的证据和思路。