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目的 人类冠状病毒HCoV-NL63与HCoV-HKU1是分别于2004年与2005年新发现的引起人类急性呼吸道感染(ARTI)的病毒.近几年,传统的人类冠状病毒HCoV-OC43与HCoV-229E也重新得到人们重视.本研究建立荧光定量PCR (FQ-PCR)法,连续检测3个冬春季福州市ARTI患儿呼吸道标本的这4种冠状病毒,以了解其流行情况与临床感染特征.方法 收集2006年10月～2007年4月、2007年10月～2008年4月、2008年10月～2009年4月连续3个冬春季,福州地区ARTI患儿咽拭子标本共538份(3个冬春季分别为21 1例、176例与151例).其中男342例,女196例,年龄15天～12岁,年龄中位数为20个月.其中急性上呼吸道感染(AURTI) 289例,急性下呼吸道感染(ALRTI) 249例.ALRTI中,肺炎213例(含支气管肺炎133例,喘息性肺炎3例),支气管炎27例,毛细支气管炎3例,哮喘6例.提取呼吸道标本的RNA,逆转录为cDNA.用本实验室自己建立的检测这4种冠状病毒的荧光定量PCR(FQ-PCR)法,检测全部538份标本的HCoV-NL63的1a基因,HCoV-HKU1的pol基因、 HCoV-OC43的N基因与HCoV-229E的M基因.结果 建立的FQ-PCR法灵敏度均达到102copies/μl,特异性良好.4种冠状病毒FQ-PCR法之间没有交叉扩增.538份标本中,检出HCoV-NL63 8例(1.5％),其中3个冬春季依次为3例(1.4％,3/211)、3例(1.7％,3/176)与2例(1.3％,2/151)；检出HCoV-229E5例(0.9％),其中3个冬春季依次为2例(0.9％,2/211)、2例(1.1％,2/176)与1例(0.7％,1/151)；检出HCoV-HKU1 6例(1.1％),其中3个冬春季依次为1例(0.5％,1/211)、2例(1.1％,2/176)与3例(2.O％,3/151)；检出HCoV-OC43 22例(4.1％),其中3个冬春季依次为9例(4.3％,9/211)、8例(4.5％,8/176)与5例(3.3％,5/151).共42例(7.8％,42/538).8例HCoV-NL63阳性者中,男4例,女4例,年龄3月～5岁,中位数年龄1岁.AURTI 1例,肺炎7例,其中2例为重症肺炎.一例女性,3个月.另1例男性,3个月,原有复杂型先天性心脏病,于入院第17天死于呼吸衰竭、心力衰竭.5例HCoV-229E阳性者中,男2例,女3例,年龄3.5月～8岁,中位数年龄1岁6月,肺炎4例,支气管炎1例.6例HCoV-HKU1阳性者中,男4例,女2例,年龄50天～4岁,中位数年龄10.5月,均为肺炎.其中一例重症肺炎伴心衰,为男性,50天.22例HCoV-OC43阳性者中,男17例,女5例,年龄50天～6岁,中位数年龄2岁3月,AURT114例,肺炎6例,支气管炎2例.未检出两种以上冠状病毒同时阳性的患儿.结论 本文建立了以上4种冠状病毒的FQ-PCR法,并进行了福州地区流行病学调查.结果提示这4种冠状病毒均是本地区冬春季儿童ARTI的病毒病原,对其进行临床检测有利于ARTI的病原学诊断与流行病学研究.