【摘 要】
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目的:研究淫羊藿苷(Icariin,ICA)促进成骨细胞成熟矿化与初级纤毛及cAMP-PKA信号通路的关系.方法:1.免疫荧光染色观察体外培养大鼠成骨细胞(osteoblast,ROBs)的初级纤毛,并利用RNA干扰法抑制胞内IFT88表达,进而去除OB细胞的初级纤毛.1μM的ICA分别处理正常组与干扰组,24h后RT-PCR检测胞内collagenⅠ(COLⅠ)、Runx-2基因表达量,West
【机 构】
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兰州军区兰州总医院全军创伤骨科研究所,甘肃兰州730050
【出 处】
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第五届中国衰老与抗衰老学术大会暨第四届全国老年基础与转化医学论坛
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目的:研究淫羊藿苷(Icariin,ICA)促进成骨细胞成熟矿化与初级纤毛及cAMP-PKA信号通路的关系.
方法:1.免疫荧光染色观察体外培养大鼠成骨细胞(osteoblast,ROBs)的初级纤毛,并利用RNA干扰法抑制胞内IFT88表达,进而去除OB细胞的初级纤毛.1μM的ICA分别处理正常组与干扰组,24h后RT-PCR检测胞内collagenⅠ(COLⅠ)、Runx-2基因表达量,Western blot检测胞内COLⅠ、Runx-2蛋白表达量;2.利用1μM的ICA处理正常ROBs细胞不同时间后,ELISA检测胞内cAMP的含量,免疫荧光法检测PKA催化亚基核转位情况,10μM腺苷酸环化酶(AC)抑制剂DDA和1μMPKA阻断剂KT5720分别抑制胞内AC和PKA活性后,1μM的ICA分别处理正常组与信号阻断组,24h后RT-PCR检测胞内collagenⅠ(COLⅠ)、Runx-2基因表达量,Western blot检测胞内COLⅠ、Runx-2蛋白表达量;3.免疫荧光法检测几种cAMP信号通路蛋白定位于初级纤毛,并利用RNA干扰法抑制定位于初级纤毛中的蛋白后,1μM的ICA处理正常组与干扰组, 24h后RT-PCR检测胞内COLⅠ、Runx-2基因表达量,Western blot检测胞内COLⅠ、Runx-2蛋白表达量.
结果:1.＞70％的ROBs具有初级纤毛，RNA干扰法抑制IFT88表达后，＞50% OB细胞的初级纤毛被去除，并且ICA促进ROHs细胞胞内COLⅠ、Runx-2表达的能力被显著抑制;2.ICA能够快速促进正常ROBS细胞内cAMP的含量，并时引起PKA催化亚基发生核转位。DDA和KT5720分别抑制胞内AC和PKA活性之后，ICA促进ROBS细胞成熟矿化的能力被抑制。3.免疫荧光定位法显示腺苷酸环化酶6(AC6)定位于初级纤毛中，RNA干扰去除AC6之后，ICA促进OB细胞COLⅠ、Runx-2表达的能力被显著抑制。
结论:淫羊藿苷促进成骨细胞成熟分化依赖于初级纤毛、cAMP-PKA信号通路及定位于纤毛中的AC6.
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