【摘 要】
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目的：构建人miR-637慢病毒过表达载体,建立稳定过表达miR-637的甲状腺癌细胞株TPC-1细胞株,检测其对细胞增殖的影响.方法：设计针对miR-637前体的过表达基因片段,应用聚合酶链反应法(PCR)扩增目的基因片段,通过基因重组技术将目的基因片段插入GV369慢病毒载体中,进行PCR鉴定及DNA测序和比对分析,构建GV369-miR-637慢病毒表达载体.用慢病毒毒液感染TPC-1,建立
【机 构】
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郑州大学第一附属医院甲状腺外科,河南省高等学校临床医学重点学科开放实室 450052
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目的：构建人miR-637慢病毒过表达载体,建立稳定过表达miR-637的甲状腺癌细胞株TPC-1细胞株,检测其对细胞增殖的影响.
方法：设计针对miR-637前体的过表达基因片段,应用聚合酶链反应法(PCR)扩增目的基因片段,通过基因重组技术将目的基因片段插入GV369慢病毒载体中,进行PCR鉴定及DNA测序和比对分析,构建GV369-miR-637慢病毒表达载体.用慢病毒毒液感染TPC-1,建立稳定过表达miR-637的TPC-1细胞株.荧光显微镜下观察GV369-miR-637慢病毒表达载体的转染效果,RT-PCR检测GV369-miR-637-TPC-1、GV369-NC-TPC-1和TPC-1三组细胞中miR-637的表达水平,CCK-8检测各组细胞的增殖能力.
结果：经限制性内切酶鉴定及DNA测序分析,成功构建GV369-miR-637慢病毒表达载体质粒.GV369-miR-637-TPC-1和GV369-NC-TPC-1细胞在荧光显微镜下均发出绿色荧光,并且转染效率高.与对照组比较,GV369-miR-637-TPC-1细胞中miR-637的表达水平显著提高,其增殖能力受到抑制.
结论：成功构建过表达miR-637的TPC-1细胞株,其抑制细胞增殖,为进一步探讨miR-637在甲状腺乳头状癌中作用与分子生物学机制奠定基础.
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