【摘 要】
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以pcDNA3.1-IL18为模板,PCR扩增获得猪白细胞介素18(IL-18)的成熟肽基因,KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,Kpn Ⅰ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转
【机 构】
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广东大华农动物保健品有限公司,广东,新兴,527439
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以pcDNA3.1-IL18为模板,PCR扩增获得猪白细胞介素18(IL-18)的成熟肽基因,KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,Kpn Ⅰ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,重组质粒经双酶切、PCR鉴定及测序,筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18.将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1mmol/L IPTG37℃诱导表达,SDS-PAGE及Western-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33Ku,与预期大小相符.将包涵体提取物用8mol/L脲变性,经Ni-NTA柱纯化,透析复性,得到纯化的IL-18蛋白.
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