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从甘蓝型油菜中克隆了1条编码类黄酮3′-羟化酶(F3′H)的全长基因,命名为BnF3′H-1。该基因全长3038bp,包含3个内含子。其cDNA长度为1820bp,有一个1536bp的开放读码框,编码一个含511个氨基酸的蛋白,其分子量为56.62kDa,等电点为7.08。BnF3′H-1基因和已经报道的F3′H基因特别是拟南芥F3′H高度同源。非翻译区(UTRs)可能在调节BnF3′H-1的表达方面起重要的作用。该基因的启始77bp中除了包含一个Kozak序列外,C含量高但G含量低,而且在启始26bp中包含三个ACCACT相似序列。在3′UTR中存在可变的poly(A)位点符合于该基因产生不同的转录本。保守域搜索和特征基序分析表明,BnF3′H-1是一个典型的细胞色素P450蛋白。所有的F3′H蛋白的特征基序如VVVAAS、GGEK和VDVKG在BnF3′H-1中没有发生改变。预测BnF3′H-1的蛋白包含三个跨膜域,并且N-端有一个信号肽,它最可能定位于内质网膜。同时它还包含有16个预测显著的磷酸化位点,故磷酸化可能是BnF3′H-1的一种转录后修饰。它的二级结构主要由α螺旋和随机卷曲组成,其中α螺旋主要位于肽链的中部,而延伸链主要位于蛋白的末端。Southern杂交表明在甘蓝型油菜中具有两个不同的F3′H基因。RT-PCR和Northern杂交表明BnF3′H在花中的表达水平最高,其次为荚果皮和种子,在其它器官中也有一定水平的表达。这种特异表达特征符合F3′H基因在甘蓝型油菜中不同组织器官中的多种功能。BnF3′H-1的ORF在大肠杆菌中表达后,纯化了组氨酸标记的蛋白,采用HPLC检测了它催化柚皮苷(naringenin)转化形成一种新物质的能力,表明BnF3′H-1蛋白具有催化活性。RT-PCR分析表明BnF3′H基因表达水平不是造成黄籽系L2与黑籽系L1之间籽色差异的原因。