【摘 要】
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甲基法尼酯(MF)是存在于甲壳动物中的一种昆虫保幼激素类似物,被认为是甲壳动物的保幼激素,目前对其分子生物学相关方面的研究进展较为缓慢.参考昆虫的研究,MF的降解可能主要由保幼激素羧酸酯酶JHE承担,目前对具有明确功能的JHE仍未见报道.本文通过建立cDNA文库和RACE克隆获得了7条与昆虫的细胞质JHE一致性较高的序列全长,命名为Sp-p-JHE1-7.7条p-JHE的氨基酸序列长度相似,最短5
【机 构】
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中国水产科学研究院东海水产研究所 上海市军工路300号 200090
【出 处】
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第十届世界华人虾蟹养殖研讨会暨2016年中国河蟹产业发展高峰论坛
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甲基法尼酯(MF)是存在于甲壳动物中的一种昆虫保幼激素类似物,被认为是甲壳动物的保幼激素,目前对其分子生物学相关方面的研究进展较为缓慢.参考昆虫的研究,MF的降解可能主要由保幼激素羧酸酯酶JHE承担,目前对具有明确功能的JHE仍未见报道.本文通过建立cDNA文库和RACE克隆获得了7条与昆虫的细胞质JHE一致性较高的序列全长,命名为Sp-p-JHE1-7.7条p-JHE的氨基酸序列长度相似,最短560,最长598个氨基酸.预测蛋白分子量为61882 Da-66729 Da,等电点5.48-6.29.除p-JHE5之外,其它6种p-JHE在N末端均含有一段17-22bp的信号肽,这说明这些p-JHE编码的蛋白产物均为可溶型的.对已经鉴定昆虫的JHE比对发现其至少包含7个保守的基序,分别为RF、DQ、GQSAG、E/D、GxxHxxD/E、R/Kx(6)R/KxxxR和T.通过与昆虫的JHE比对发现它们与昆虫中经过鉴定的JHE的序列相似性较低,均为30％左右.而其中p-JHE3除GxxHxxD/E变为WxxHxxE外,其它几个基序均完全一致,据此我们推测p-JHE3最有可能是具有活性的JHE.从NCBI上下载昆虫的经过鉴定的JHE及甲壳动物假定的JHE的氨基酸序列,利用MEGA 5.1软件构建UPGMA进化树显示甲壳动物的假定的JHE聚在一起,亲缘关系较近的昆虫的JHE聚在一起.在拟穴青蟹所有假定的JHE中,Sp-p-JHE6和Sp-p-JHE3与昆虫的JHE的亲缘关系较近.然而所有甲壳动物假定的JHE之间的相似性高于任意一种Sp-p-JHE与昆虫JHE之间的相似性,对几种昆虫的JHE在NCBI上blast结果显示它与自身或亲缘关系相近物种羧酸酯酶具有最高的同源性,显著高于与其它亲缘关系较远的物种JHE,这表明JHE的进化可能发生在物种分化之后.对于具有活性的JHE仍需进行表达水平以及蛋白水平的验证.
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