【摘 要】
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分别提取六株抗葡萄球菌肠毒素单抗杂交瘤细胞总RNA,采用RT-PCR技术,扩增轻重链可变区基因片段并克隆测序。测序结果表明,所获基因均符合小鼠抗体轻重链可变区经典结构特
【机 构】
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天津大学化工学院,天津 300072
【出 处】
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第三届京津冀畜牧兽医科技创新研讨会暨“瑞普杯”新思想、新方法、新观点论坛
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分别提取六株抗葡萄球菌肠毒素单抗杂交瘤细胞总RNA,采用RT-PCR技术,扩增轻重链可变区基因片段并克隆测序。测序结果表明,所获基因均符合小鼠抗体轻重链可变区经典结构特征,且为功能性V(D)J基因重组模式。通过重叠PCR、拼接VH、IRES及VL序列,构建轻重链基因真核单启动子共表达载体p2C2HILO和p5C12HILO,经Lip02000脂质体介导转染BHK-21细胞后,筛选高效表达稳定分泌哺乳动物细胞系。利用酶联免疫吸附反应(ELISA)、细胞间接免疫荧光(IFA)及流式细胞术(FCM)方法进行免疫学分析,制备的基因工程重构抗体均为胞内蛋白,能够识别天然肠毒素SEA及多种重组肠毒素,且具有较高特异性和较强亲和力。
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