短链RNA抑制神经母细胞瘤MYCN基因表达诱发肿瘤细胞凋亡

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目的:MYCN基因扩增与否是判断神经母细胞瘤预后及分型的重要指标。我们拟通过抑制MYCN高扩增NB肿瘤细胞中MYCN的表达,并观察肿瘤细胞凋亡、增殖的改变,为以MYCN扩增与否为标志的NB个体化治疗积累数据。方法:设计合成MYCN短链干扰RNA,转染MYCN高扩增表达的神经母细胞瘤细胞系LAN-1,抑制MYCN基因的表达,荧光定量PCR法及western-blot法检验MYCN mRNA及蛋白表达受抑制情况;培养24小时后ELISA法检验DNA碎片,检验肿瘤细胞凋亡,western-blot法检验神经元特异性烯醇酶表达检验肿瘤细胞分化情况。结果:荧光定量PCR显示,转染12h MYCN mRNA表达0.53±0.10、24h MYCN mRNA表达0.28±0.09,表达显著降低(P<0.05),western-blot转染12h MYCN mRNA表达0.76±0.13、24hMYCNmRNA表达0.44±0.07,表达显著降低(P<0.05),提示MYCN-siRNA可以有效抑制肿瘤细胞中MYCN基因表达;MYCN基因表达抑制后神经母细胞瘤细胞凋亡增加(抑制组DNA碎片值1.90±0.12,对照组1.13±0.09,P<0.05),且NSE表达增高(抑制组0.472±0.102,对照组1.035±0.140,P<0.05),提示LAN-1肿瘤细胞分化增强。结论:抑制MYCN高表达扩增神经母细胞瘤中MYCN基因的表达可以促进肿瘤细胞凋亡,促进细胞分化。
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