目的 探讨硫丹诱发小鼠精原细胞凋亡的毒作用机制。方法 实验采用小鼠GC-1 spg精原细胞为实验对象,首先设计5个不同浓度的硫丹(3,6,12,24,36 mg·L-1)进行染毒,观察它们在作用6,12, 24,48 h后对精原细胞活性和乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响；在此基础上,选取6,12和24 mg, L-1三个硫丹浓度和24 h作用时间,探讨硫丹引发其凋亡的作用机制。采用MTT法测定硫丹对GC-1 spg精原细胞活性的影响；比色法测定细胞培养液中LDH的活性、细胞中ATP含量、SDH活性及胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶8,胱天蛋白酶9活性的改变；Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测凋亡率；FCM检测细胞内ROS水平；Western blotting法检测细胞凋亡信号通路相关因子蛋白的表达。结果 硫丹作用6h,GC-1 spg精原细胞活性在6,12,24和36 mg,L-1组明显低于对照组,硫丹作用12,24,48 h,细胞活性在3,6,12,24和36 mg,L-1组明显低于对照组,呈现明显的时间和剂量依赖关系。细胞外液中LDH的活性随着硫丹剂量的增加逐渐增加,在6,12,24和36 mg·L-1剂量组明显高于对照组和3 mg,L-1剂量组。硫丹作用24 h,细胞内ATP含量和SDH活性均随着硫丹剂量的增加逐渐降低,在6,12和24 mg, L-1组均明显低于对照组。而ROS水平和细胞凋亡率及胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶8,胱天蛋白酶9活性均随着硫丹浓度的升高逐渐增加,呈现剂量依赖效应,其中ROS水平、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9活性在硫丹剂量为6,12和24 mg·L-1组均明显高于对照组,细胞凋亡率和胱天蛋白酶3活性在硫丹剂量为12和24 mg·L-1组明显高于对照组。硫丹作用24 h,Bax和细胞色素C(CytC)的蛋白表达量随着硫丹剂量的增加而升高,在硫丹剂量为12和24 mg·L-1组均明显高于对照组,而Bcl-2蛋白表量随着硫丹剂量的增加而下降,在硫丹剂量为12和24 mg· L-1明显低于对照组。结论 硫丹可能通过诱发氧化应激,激活死亡受体途径中胱天蛋白酶8,导致其下游的胱天蛋白酶3激活；另一方面,氧化应激导致线粒体能量代谢障碍,引起促凋亡因子Bax激活,促进线粒体中细胞色素C进入胞质,激活胱天蛋白酶9,引发其下游的效应子胱天蛋白酶3激活。这说明,硫丹可能同时激活了细胞凋亡的死亡受体途径和线粒体途径引发了GC-1 spg精原细胞凋亡。