【摘 要】
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探讨不同温度下剑尾鱼注射免疫后免疫球蛋白M(IgM)的mRNA在脾脏和头肾中转录水平的变化。根据IgM和β-actin mRNA序列,设计并合成引物,建立了两步法荧光定量RT-PCR技术平台。
【机 构】
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大连水产学院; 中国水产科学研究院珠江水产研究所;
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探讨不同温度下剑尾鱼注射免疫后免疫球蛋白M(IgM)的mRNA在脾脏和头肾中转录水平的变化。根据IgM和β-actin mRNA序列,设计并合成引物,建立了两步法荧光定量RT-PCR技术平台。实验分别设定18℃、23℃、28℃、33℃四个温度梯度,在免疫后的2 d、4 d、7 d、11 d、16 d和22d分别取脾脏和头肾,利用两步法荧光定量RT-PCR检测两种组织中IgM mRNA的转录水平,发现在不同温度下随着免疫时间呈现出不同的变化趋势。实验发现在18℃水温下,剑尾鱼的IgM在两种组织中转录水平上升得较慢,随着水温的升高,在23℃、28℃水温下,其IgM表达水平上升较快,尤其是在28℃水温下,不仅IgM表达水平迅速上升,且达到一个最高值,但在33℃较高水温条件下,IgM表达量并没有更高的上升幅度,而是与18℃水温下的IgM表达相比有所提高。剑尾鱼注射免疫后在脾脏和头肾中都检测到了IgM表达的上调,初步认为利用荧光定量RT-PCR检测剑尾鱼脾脏和头肾sIgM的mRNA表达变化替代检测血清中抗体效价具有可行性。
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