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目的:构建重组蚊浓核病毒,实验室初步测试其杀蚊效果。
方法:将东亚钳蝎Buthus martensii Karsch昆虫特异性毒素BmKIT1基因亚克隆入含有埃及伊蚊浓核病毒(Aedes aegypti densovirus,AeDNV)全基因组序列的质粒载体pUCA中,C端融合表达报告分子绿色荧光蛋白EGFP,构建成重组病毒质粒pUCA—BmKIT1-EGFP。以pUCA为辅助质粒与pUCA—BmKIT1-EGFP共转染C6/36细胞,通过病毒的自我拯救,获得重组病毒。采用real time PCR对病毒进行定量,感染实验室白纹伊蚊各期幼虫检测其杀虫效果。
结果: RT—PCR、westem blot显示转染后48h BmkIT1在C6/36 cell表达,荧光显微镜下可见绿色荧光。重组病毒感染蚊虫 48h后,荧光显微镜下可见绿色荧光。重组病毒感染组蚊虫半数生存时间与中位生存时间LT(50)。明显低于对照组(p≤0.01)。
结论:表达BmKIT1的重组蚊浓核病毒能更快速有效的杀伤蚊虫,可进一步开发为特异性的蚊虫生物杀虫剂。