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目的:筛选降解疯草中苦马豆素(SW)的相关基因,为构建降解SW基因工程菌奠定基础。
方法:经BamHI不完全酶切构建基因组文库,以SW为惟一碳源进行培养,用薄层色谱和气相色谱内标法检测基因组文库降解SW效果;取培养液稀释后划线接种至含100|ng/L SW的无机盐固体培养基,挑取100个单菌落,制备质粒并进行酶切;测定含不同质粒菌株的组合降解SW能力,同时测序并用ORF Finder和Blast软件对测序结果进行分析。
结果:构建的基因组文库在12h内能完全降解100mg/L的SW;从库中筛选出5株菌,分别含有1个编码功能基因的开放阅读框,与谷胱甘酰精脒合成酶、糖基转移酶、二氢叶酸还原酶、脂肪酶、双组分转录调节器编码氨基酸的同源性分别为97%、47%、85%、94%,53%;5株菌的组合降解SW能力证实,与基因组文库降解效果一致。
结论:在节杆菌HW08基因组文库中筛选出5株能组合降解SW的菌,推测编码谷胱甘酰精脒合成酶、糖基转移酶、二氢叶酸还原酶、脂肪酶、双组分转录调节器的基因为降解SW相关基因。