论文部分内容阅读
通过对CTV(Citrus Trsitiza Virus)全基因组中的三个RNA沉默抑制因子保守序列设计引物，获得了p25、P20和p23的保守核苷酸序列。应用获得的保守核苷酸序列，我们成功构建了p25和p20的RNAi载体。通过采用重叠延伸PCR拼接法(SOE)获得了两个多基因片段p2520和p252023，并分别构建了含其倒转重复序列的RNAi载体。以意大利酸橙和锦橙的上胚轴为外植体，采用农杆菌介导法对构建好的4个RNAi载体进行了遗传转化。通过共培养和筛选培养，共获得了 20个抗性不定芽。将这些抗性不定芽进行了嫁接，其中嫁接成活了15株。以转基因植株的基因组DNA为模板进行PCR检测，结果显示其中有14株为转基因植株。对转基因植株经过两次CTV攻毒试验后进行检测发现，目前已经证实有1株转基因酸橙植株表现出对CTV强度株系TRL514具有抗性。此研究不仅有町能获得抗CTV的砧木新品种，而且为柑橘的抗病育种提供了一些参考。