【摘 要】
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以致病黏质沙雷氏菌(Serrafia marcescens)人工感染的黄喉拟水龟(Mauremys mutica)肝,脾,肾组织为材料,应用SMART (switching mechanism at 5end of RNA transcript)技术,构建了黄喉拟水龟的全长cDNA文库.首先用SMARTTM PCR cDNA systhesiskit合成全长的双链cDNA,通过琼脂糖凝胶分级分离技
【机 构】
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中国水产科学研究院珠江水产研究所,广州,510380;上海海洋大学水产和生命学院,上海,200090
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以致病黏质沙雷氏菌(Serrafia marcescens)人工感染的黄喉拟水龟(Mauremys mutica)肝,脾,肾组织为材料,应用SMART (switching mechanism at 5end of RNA transcript)技术,构建了黄喉拟水龟的全长cDNA文库.首先用SMARTTM PCR cDNA systhesiskit合成全长的双链cDNA,通过琼脂糖凝胶分级分离技术切除小片段的cDNA,将大于500bp的cDNA连接到PGEM-T载体中,电转化到JM109感受态细胞.在构建好的文库中,经测定,文库约含有1.8×105个重组子,重组效率达90.54％,插入片段多在0.5kb～3 kb之间.对库中长度约为1000bp的80个基因进行了测序,结果显示大部分首次在爬行动物发现.
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