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目的:摸索出最佳分离纯化和复性重组禽流感病毒NSI抗原的方法,得到高纯度的重组蛋白。
方法:将重组质粒pET32a-NS1转染大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物分别以尿素变性、复性,Ni-NTA His.Bind Resin亲和以及脱氧胆酸钠-N-十二烷基肌氨酸钠(DOC-SKL)洗涤溶解等3种纯化方法分别从包涵体中分离纯化NS1蛋白,并进行比较研究。
结果:通过原核表达得到分子量约45ku的目的蛋白,三种方法均能分离和纯化出NS1重组蛋白,其中尿素纯化的蛋白纯度为50-60 %:Ni-NTA His.Bind Resin亲和纯化的蛋白纯度为80-90 %;脱氧胆酸钠-N-十二烷基肌氨酸钠(DOC-SKL)纯化的NSl蛋白的纯度达95%以上,western-blot检测表明复性后的纯化蛋白具有良好的生物学活性。
结论:应用十二烷基肌氨酸钠洗涤纯化是最佳的纯化NS1蛋白的方法,所获得的蛋白可作为包被ELISA的抗原。