根据高致病性猪蓝耳病病毒(PRRSV)的NSP2基因序列设计合成引物和TaqMan荧光探针,并对其进行了优化筛选;对荧光RT-PCR的反应条件进行优化,建立了高致病性猪蓝耳病荧光RT-PCR检测方法。将PRRSV细胞培养物系列稀释后,用建立的高致病性猪蓝耳病荧光RT-PCR和高致病性猪蓝耳病普通RT-PCR方法同时进行检测.结果显示,所建立的高致病性猪蓝耳病荧光RT-PCR方法检测下限可达1个TCID50,比常规RT-PCR灵敏度高100倍;同时根据灵敏度实验建立了标准曲线,能够对PRRSV RNA进行相对定量.用建立的高致病性猪蓝耳病荧光RT-PCR方法对美洲型PRRSV标准毒株和欧洲型PRRSV标准毒株及常见猪细菌病毒同时进行检测,结果表明,所建立的荧光RT-PCR方法特异性强,仅能特异性的检测出高致病性猪蓝耳病。用该方法对收集的正常临床样本和2007年某发病猪场送检的猪血清和多种组织样品进行检测。结果发现,高致病性猪蓝耳病荧光RT-PCR方法与病毒分离方法的阳性符合率为100%,且通过对阳性病料中不同组织感染RNA的相对定量,初步探讨了PRRSV在猪体内的感染规律。通过对临床样本的检测,表明建立的高致病性猪蓝耳病荧光RT-PCR方法具有良好的特异性和重复性,可应用于高致病性猪蓝耳病的检测,满足当前对PRRS疫情的防控需要。