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仔猪早期断奶是缩短母猪繁殖周期,提高母猪产胎次数的重要技术,但却严重影响仔猪对日粮养分的消化吸收,最终导致其生产性能降低。因此,改善仔猪肠道结构与功能,提高饲料利用率是养猪生产中急需解决一项难题。猪表皮生长因子(pEGF)具有促进肠道细胞增殖与分化,修复受损肠道,诱导消化酶分泌等作用。通过外源方法供给仔猪pEGF,可缓解早期断奶造成的肠道损伤,对仔猪肠道发育具有重要作用。pEGF来源和供应非常有限,基因工程手段是获得pEGF的一种好方法。本试验采用乳酸乳球菌(L.lactis)高效诱导表达系统,构建表达pEGF重组L.lactis,通过小鼠DSS结肠炎模型试验评定重组pEGF对损伤肠道修复作用。根据pEGF氨基酸序列及L.lactis对密码子偏好性,人工设计3个pEGF串联片段并合成,将获得的基因片段与pNZ8148载体连接,电转化至L lactis中;重组质粒进行PCR、双酶切和测序验证,Western blot检测目的蛋白表达活性。制作小鼠DSS结肠炎模型,选取32只6周龄雄性BALB/c小鼠,随机分成4组,每组8只,制作DSS结肠炎模型,小鼠同时口服重组L.lactis NZ9000(pNZ8148-pEGF3)。结果显示,目的基因在转化L.lactis过程中基因序列未发生突变,Western blot证实L.lactis能够表达pEGF,并具有活性。小鼠试验结果显示,DSS模型组小鼠出现明显便血、腹泻和体重降低的现象;苏木精-伊红染色检测显示,模型组小鼠结肠黏膜上皮细胞脱落,裸露,伴溃疡形成,较多炎症细胞浸润,溃疡周边可见上皮细胞增生;与正常对照组比较,模型组小鼠结肠长度显著降低(P<0.05),结肠组织紧密连接蛋白occludin浓度显著降低(P<0.05),IL-10和IL-4浓度显著降低(P<0.05),TNF-α浓度显著增加(P<0.05)。与DSS模型对照组比较,灌服重组L.lacits的小鼠体重降低较少,结肠长度、紧密连接蛋白浓度、IL-10和IL-4浓度显著增加(P<0.05),分别增加34.32%、40.63%、58.87%和27.86%,TNF-α浓度降低14.18%。(结论)DSS造成小鼠结肠结构和功能严重损伤,L.lacits表达的重组pEGF具有良好生物活性,可修复受损结肠组织,维持肠道黏膜屏障完整性,对促进肠道健康具有重要作用。表达pEGF重组L.lacit成功构建,为进一步向目的动物-早期断奶仔猪应用延伸提供了依据。