【摘 要】
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【研究背景】土壤盐碱化是影响农作物质量和产量的非生物胁迫之一。大量研究表明在盐胁迫条件下液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白对植物的生存具有重要的作用,可以将细胞质中过多的Na+区域化至液泡中,以减轻对细胞质的离子毒害,并维持细胞中离子与渗透势的平衡,提高植物的耐盐性。因此,构建甜菜液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白过表达载体并在本氏烟草中过表达,对其功能进行研究变得非常有必要;【材料与方法】本研究以本氏烟
【出 处】
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第十九届中国作物学会学术年会论文摘要集
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【研究背景】土壤盐碱化是影响农作物质量和产量的非生物胁迫之一。大量研究表明在盐胁迫条件下液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白对植物的生存具有重要的作用,可以将细胞质中过多的Na+区域化至液泡中,以减轻对细胞质的离子毒害,并维持细胞中离子与渗透势的平衡,提高植物的耐盐性。因此,构建甜菜液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白过表达载体并在本氏烟草中过表达,对其功能进行研究变得非常有必要;【材料与方法】本研究以本氏烟草的叶片作为外植体,建立其高效组培再生体系。再通过农杆菌介导叶盘转化法,将甜菜液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白BvNHX基因导入本氏烟草中以验证其功能;【结果与分析】以本氏烟草叶片为外植体,通过筛选各阶段的最适培养基初步建立了烟草的组培体系。其中,培养基MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.2 mg/L是烟草叶片愈伤组织诱导的最佳培养基;MS+6-BA 2.0 mg/L是烟草不定芽分化培养的最佳培养基;MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L是烟草不定芽增值最佳培养基。以甜菜（BetavulgarisL.）叶片总RNA为模板,克隆甜菜液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因BvNHX的全长c DNA,通过对甜菜液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因BvNHX全长序列的分析,选取大小为1653bp的一段序列做为目的序列,设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR的方法克隆得到该片段,以中间载体pUCm-T和表达载体pCAMBIA1302为基础,采用酶切和连接的方法,成功构建BvNHX超表达载体pCAMBIA1302-BvNHX,利用冻融法转化至农杆菌GV3101。以此为基础,用根癌农杆菌介导叶盘转化法,以期将BvNHX1基因导入本氏烟草中,获得转基因植株并对其进行功能验证;【结论】在本研究中,初步建立了本氏烟草组培体系,通过对重组质粒pCAMBIA1302-BvNHX双酶切鉴定,成功构建了甜菜液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白BvHNX基因超表达载体。为进一步研究该基因的功能奠定基础。
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