【摘 要】
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目的.构建并制备survivin启动子调控的条件复制腺病毒,探讨其特异性溶瘤作用.方法： PCR方法分别扩增肿瘤特异性survivin启动子,代替腺病毒载体pDC315载体的CMV启动子,调控
【机 构】
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第四军医大学唐都医院临床实验与检验、输血科,陕西西安,710038
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目的.构建并制备survivin启动子调控的条件复制腺病毒,探讨其特异性溶瘤作用.方法： PCR方法分别扩增肿瘤特异性survivin启动子,代替腺病毒载体pDC315载体的CMV启动子,调控腺病毒复制必需基因E1A的表达,构建出肿瘤特异性启动子调控的条件复制腺病毒载体pDC315-SP-E1A-EGFP；脂质体法与粒pBHGlox △E1,3Cre骨架质粒共转染293E细胞进行重组腺病毒包装,稀释法测定腺病毒滴度；应用MTT、活细胞计数等方法观察其对宫颈癌细胞Hela的特异性溶瘤作用并以正常人的血管内皮细胞ECV304作为对照.结果：测序及双酶切鉴定结果证实,成功构建了肿瘤特异性启动子调控复制腺病毒载体；在293E细胞中获得了重组腺病毒Ad-SP-E1A,滴度测定显示病毒滴度达到2.8×109TCID50/ml；细胞形态观察结果显示,重组腺病毒在宫颈癌细胞中选择性复制并发挥溶细胞作用.结论：肿瘤特异启动子调控的腺病毒具有显著的溶瘤作用但对正常人血管内皮细胞不发挥溶细胞作用,实验结果为宫颈癌靶向治疗提供了更为良好的条件复制型病毒载体及新的治疗策略.
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