亚洲玉米螟Bt抗、感品系V-ATPase subunit A基因克隆及差异分析

来源 :中国植物保护学会2011年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:stevenst
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  转Bt基因抗虫作物以其良好的杀虫活性和专一性,在全世界范围得到推广种植,到2010年,全球转Bt抗虫作物种植面积达2 630万hm2.Bt作物的大面积种植使靶标害虫长期处在毒素的胁迫下,存在导致害虫对Bt抗性的产生,研究害虫抗性产生的分子机理,提出科学的治理策略,对避免或延缓抗性发生具有重要意义.本文运用RTPCR结合RACE等方法,克隆得到了亚洲玉米螟幼虫中肠上Bt毒素结合位点蛋白V-ATPase subunit A基因(VAA),并比对了这一基因在亚洲玉米螟敏感(ACB-BtS)、Cry1 Ab(ACB-AbR)抗和Cry1Ac(ACB-AcR)抗3个品系中的序列差异.结果显示VAA基因cDNA序列全长2 537 bp,开放阅读框1 854 bp,编码617个氨基酸,预测蛋白分子量68.07kDa,等电点(pI)为4.90.在两个抗性品系中VAA基因有不同程度的核苷酸突变发生,在ACB-AbR抗性品系发现29个突变位点,在ACB-AcR抗性品系中发现42个突变位点,突变位点都发生在密码子第三位,两个抗性品系的VAA基因翻译后氨基酸序列与敏感品系完全一致,这一结果符合氨基酸密码子的简并性,推测其密码子第三位的突变可能与其转座子在亚洲玉米螟体内的丰度有关.Bt敏感、Cry1Ab和Cry1 Ac抗性亚洲玉米螟品系幼虫中肠上VAA的cDNA序列已提交GenBank,分别是HQ434762、HQ540514和FR727328.
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