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【目的】在课题组前期研究已证实黏菌素(colistin)可诱导大鼠PC12细胞(交感神经细胞系)发生自噬的基础上,进一步探讨p53蛋白对黏菌素诱导PC12细胞发生的自噬是否存在凋节作用。【方法】PC12细胞转染p53 siRNA使p53蛋白有效沉默,以及转染p53过表达质粒使p53蛋白过表达,运用Western blot法鉴定p53干扰效率,并通过p53免疫荧光确定p53蛋白的亚细胞定位。将黏菌素作用于PC12细胞12 h或24 h,试验设立空白组、colistin(12 h、24 h)组、colistin+negative control(NC)(12 h、24 h)组、colistin+sip53(12 h、24 h)组、colistin+pcDNA3.1(12 h、24 h)组和colistin+pcDNA3.1+p53(12 h、24 h)组,采用上述实验方法检测细胞自噬和凋亡的相关基因和蛋白表达量变化,结合形态学变化和一系列生化指标改变,分析并探讨p53基因沉默及过表达在黏菌素诱导自噬过程中的调控机制;再分别使用100 nM溶酶体抑制剂(BFA)和5 mM自噬抑制剂(3-MA)分别将细胞做预处理,检测自噬和凋亡的标志性蛋白表达的指标及细胞形态学变化,以分析和评定p53基因表达量变化对自噬功能的影响。【结果】(1)与阴性对照组相比(colistin+NC;colistin+pcDNA3.1),Western blot和p53免疫荧光的检测结果显示,p53 siRNA和pcDNA3.1+p53能有效地沉默和过表达细胞质中的p53基因。(2)与阴性对照组相比(colistin+NC),在黏菌素诱导的p53基因沉默组PC12细胞中,12 h时间点自噬相关基因和蛋白表达量明显降低(p<0.01),LC3免疫荧光点减弱,电镜下观察自噬小体减少;24h时间点自噬相关基因和蛋白表达量显著增加(p<0.01),LC3免疫荧光点增加,电镜下观察自噬小体增多。(3)与colistin+sip53组相比,colistin+sip53+BFA组自噬通量指标无显著变化;colistin+sip53+3-MA组凋亡相关活性蛋白表达量显著降低(p<0.01),细胞核固缩、偏移现象减少。(4)与阴性对照组相比(colistin+pcDNA3.1),在黏菌素诱导的p53基因过表达组PC12细胞中,自噬相关基因和蛋白表达量明显降低(p<0.01)并呈现时间依赖性,LC3免疫荧光点减弱,电镜下观察自噬小体明显减少;凋亡相关活性蛋白及基因的表达量显著降低(p<0.01),细胞核固缩、偏移现象明显。【结论】p53蛋白沉默使得黏菌素诱导的PC12细胞自噬现象在12 h时下调、24 h上调,并且上调的自噬促进黏菌素诱导的细胞凋亡;p53蛋白的过表达抑制黏菌素诱导的自噬并加速了细胞凋亡现象的发生。