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布鲁氏菌是一种兼性胞内寄生革兰氏阴性菌,其具有独特的生物学活性,并且和宿主的免疫系统间存在着复杂的相互作用。布鲁氏菌强毒株能抵抗细胞的杀伤作用,能部分削弱巨噬细胞的吞噬能力,从而使巨噬细胞的杀伤作用和抗原呈递能力部分减弱,使得逃避宿主免疫防御,造成持续感染[1]。目前对布鲁氏菌侵入宿主细胞后引起的信号通路改变已经取得了一定的进展,但是这些研究主要集中在对布鲁氏菌感染巨噬细胞过程中在细胞抵抗凋亡的作用。研究目的:布鲁氏菌能够造成慢性感染但其具体的致病机制仍然不清楚,特别是与免疫细胞之间的交互作用,NF-κB通路参与了早期炎症反应是免疫反应的重要环节,因此探讨布鲁氏菌感染与NF-κB通路调控的关系是本研究的最终目的。实验方法:通过Western Blot与实时定量PCR实验检测了布鲁氏菌感染后NF-κB通路的激活状态,加入NF-κB抑制剂后,通过ELISA试验与细菌CFU计数检测了布鲁氏菌强弱毒株的感染过程中细胞内外免疫相关因子的表达,胞内荷菌量,脾指数,以及脾脏CFU计数。研究结果:疫苗株布鲁氏菌菌株(RB51)能够激活NF-κB信号通路,当加入NF-κB抑制剂(BAY11-7085)后NF-κB p65的磷酸化将会受到抑制,呈剂量依赖性。在胞内对NF-κB信号通路进行抑制后能够显著降低了Th1免疫应答,提高了布鲁氏菌RB51在细胞内外的复制率。在细胞外,当NF-κB通路被抑制后,能够不同程度的增加细菌在脾脏内的复制和繁殖,影响小鼠的生存率。然而NF-κB信号通路在感染布鲁氏菌菌株(2308)中只能微弱被激活,加入NF-κB抑制剂后,不能够影响Th1免疫反应,也不能影响布鲁氏菌在胞内外的生存.结论与讨论:本研究表明NF-κB信号通路在体外和体内对Th1免疫应答和布鲁氏菌疫苗株RB51的存活起重要调控作用。此外,NF-κB信号通路不能够调控布鲁氏菌强毒株2308在胞内胞外的生存繁殖。因为布鲁氏菌疫苗株RB51是由于布鲁氏菌强毒株2308LPS突变而来,本试验中巨噬细胞被不同结构LPS的布鲁氏菌刺激后,可能通过NF-κB活化后诱导NF-κB p65的磷酸化来调控胞内促炎因子的基因转录和蛋白分泌,而该通路的激活是否和LPS的差异有关还有待进一步研究。总而言之,我们初步得出布鲁氏菌疫苗株RB51在胞内外的生存与NF-κB信号通路活性密切相关,不同种型的布鲁氏菌对NF-κB信号通路活性的影响也有差异,可为进一步研究布鲁氏菌的胞内致病机制奠定理论基础。