论文部分内容阅读
目的:研究黄芩素激活Nrf2/ARE信号通路对黑素细胞氧化应激损伤的保护作用.方法 不同浓度黄芩素(10、20、40 μM)处理黑素细胞(PIG1)24 h以及用40 μM分别处理0,1,3,6,12 h,western blot及激光共聚焦检测Nrf2、p-Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达及核转位情况;不同浓度黄芩素(10、20、40 μM)处理黑素细胞6,12,24 h后,RT-PCR检测NQO1和HO-1mRNA表达水平;Nrf2-siRNA转然后,Western blot检测NQO1、HO-1蛋白表达情况;HO-1及NQO1抑制剂处理黑素细胞1h后,加入40 μM黄芩素处理1h,然后加入H2 O2处理24 h,流式细胞术检测细胞内ROS水平,CCK-8检测细胞活力.结果 黄芩素可呈剂量和时间依赖性地诱导人表皮黑素细胞中Nrf2通路下游抗氧化酶HO-1及NQO1表达;黄芩素作用于黑素细胞24 h后,Nrf2、HO-1、NQO1核转位明显,且表达量明显增多,p-Nrf2表达量亦较对照组明显增高;黄芩素作用于黑素细胞后可诱导HO-1、NQO1蛋白表达,但干涉Nrf2后,HO-1、NQO1蛋白表达明显降低;流式细胞仪检测结果显示:1.0 mM H2 O2作用24 h后细胞内ROS水平升高,黄芩素干预后,细胞内ROS水平降低,加入HO-1、NQO1抑制剂后,ROS水平明显升高;CCK-8结果显示:1.0mM H2O2作用24h后细胞存活率降低,黄芩素干预后,细胞存活率升高,加入HO-1、NQO1抑制剂后,细胞存活率明显降低.结论 黄芩素可通过激活Nrf2/ARE信号通路,诱导下游抗氧化酶HO-1、NQO1表达,抵抗氧化应激对黑素细胞的损伤.