【摘 要】
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目的：本实验通过克隆与高效表达无乳链球菌细胞表面菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因编码蛋白抗原优势区,并进行抗原性分析及鉴定。方法：根据Genbank上公布的牛乳腺炎无乳链球菌辅助蛋白AP1(EU929387.1)基因序列,利用生物信息学学软件Primer5.0和DNAMAN,根据其骨架蛋白保守序列设计、合成了1对克隆引物,以分离于内蒙古东部地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模版,扩增辅助蛋白AP1基
【机 构】
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College of Life Science,Inner Mongolia University for Nationalities,Tongliao 028043,Inner Mongolia,C
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十二届学术研讨会
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目的：本实验通过克隆与高效表达无乳链球菌细胞表面菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因编码蛋白抗原优势区,并进行抗原性分析及鉴定。方法：根据Genbank上公布的牛乳腺炎无乳链球菌辅助蛋白AP1(EU929387.1)基因序列,利用生物信息学学软件Primer5.0和DNAMAN,根据其骨架蛋白保守序列设计、合成了1对克隆引物,以分离于内蒙古东部地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模版,扩增辅助蛋白AP1基因序列,经克隆与测序后构建重组表达载体AP1-pET30转化大肠杆菌工程菌BL21,并进行高效表达,经亲和层析纯化后进行western blot鉴定.结果：结果表明克隆的抗原表位序列片段大小为714bp,编码238氨基酸残基,与GenBank上公布的AP1 (EU929387.1)基因序列相似性达到99.72％,氨基酸残基相似性达到99.58％.经诱导获得可溶性高效表达,纯化后重组蛋白的纯度达到95％以上.Western blot分析结果表明重组蛋白能够被牛源无乳链球菌阳性血清识别,具有良好的反应性.结论：该实验为进一步研究辅助蛋白AP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定提供了实验基础.
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