目的:应用LC/MS和LC/MSE方法对单克隆抗体曲妥珠单抗(人源化单克隆免疫球蛋白抗体(IgG1))的结构进行深度表征。方法 :先用LC/MS对曲妥珠单抗完整蛋白及其亚基的分子量进行测定;然后用多种酶(胰蛋白酶和AspN)酶解蛋白并用LC/MSE肽图分析法对曲妥珠单抗的氨基酸全序列进行解析和确定,同时对可能发生的翻译后修饰(PTMs)进行定性和定量分析。再通过PNGase F酶来释放抗体上的糖链并应用LC/FLR/MS方法对其糖基化修饰进行结构分析及确认。结果 :对曲妥珠单抗的完整蛋白及其亚基(轻链和重链)的分子量测定得到良好的质量准确度,由此可判定特定蛋白修饰在轻链和重链上的分布。通过对曲妥珠单抗酶解后的氨基酸全序列确认,可对其翻译后修饰以及可能的错误氨基酸序列进行解析。该抗体肽图分析的氨基酸序列覆盖率是100%。糖基化分析是通过对游离的N-连接寡糖进行2-AB荧光标记后再用LC/FLR/MS方法来进行的。联合使用这些分析方法,能够有效地对不同批号和不同工艺的抗体药物进行常规质量检测和深度表征,控制抗体药物的质量,为病人提供安全可靠的生物治疗药品。结论 :结合液质联用(LC/MS和LC/MSE)技术,通过完整蛋白分子量的测量,肽图分析测定氨基酸序列以及翻译后修饰的定性和定量分析,结合游离N-连接寡糖的分析表征,对单克隆抗体曲妥珠单抗进行了全面的结构表征,并建立了一套针对单克隆抗体结构进行综合表征的完整方案。